Gel-Elektrophorese

Gel-Elektrophorese ist eine in der klinischen Chemie verwendete Methode, um Proteine durch die Anklage und oder Größe (IEF agarose, im Wesentlichen Größe unabhängig) und in der Biochemie und molekularen Biologie zu trennen, um eine Mischbevölkerung der DNA und RNS-Bruchstücke durch die Länge zu trennen, die Größe der DNA und RNS-Bruchstücke zu schätzen oder Proteine durch die Anklage zu trennen. Nukleinsäure-Moleküle werden durch die Verwendung eines elektrischen Feldes getrennt, um die negativ beladenen Moleküle durch eine agarose Matrix zu bewegen. Kürzere Moleküle bewegen sich schneller und wandern weiter ab als längere, weil kürzere Moleküle leichter durch die Poren des Gels abwandern. Dieses Phänomen wird genannt siebend. Proteine werden durch die Anklage in agarose getrennt, weil die Poren des Gels zu groß sind, um Proteine zu sieben. Gel-Elektrophorese kann auch für die Trennung von nanoparticles verwendet werden.

Gel-Elektrophorese verwendet ein Gel als ein anticonvective Medium und oder siebendes Medium während der Elektrophorese, der Bewegung einer beladenen Partikel in einem elektrischen Feld. Gele unterdrücken die Thermalkonvektion, die durch die Anwendung des elektrischen Feldes verursacht ist, und können auch als ein siebendes Medium handeln, den Durchgang von Molekülen verzögernd; Gele können auch einfach dienen, um die beendete Trennung aufrechtzuerhalten, so dass ein Postelektrophorese-Fleck angewandt werden kann. DNA-Gel-Elektrophorese wird gewöhnlich zu analytischen Zwecken häufig nach der Erweiterung der DNA über PCR durchgeführt, aber kann als eine Vorbereitungstechnik vor dem Gebrauch anderer Methoden wie Massenspektrometrie, RFLP, PCR, Klonen, DNA sequencing oder das Südliche Beflecken für die weitere Charakterisierung verwendet werden.

Trennung

In einfachen Begriffen: Elektrophorese ist ein Verfahren, das das Sortieren von Molekülen ermöglicht, die auf der Größe und Anklage gestützt sind. Mit einem elektrischen Feld können Moleküle (wie DNA) gemacht werden, sich durch ein Gel zu bewegen, das aus dem Agar oder polyacrylamide gemacht ist. Die Moleküle, die sortieren werden, werden in gut im Gel-Material verteilt. Das Gel wird in einen Elektrophorese-Raum gelegt, der dann mit einer Macht-Quelle verbunden wird. Wenn der elektrische Strom angewandt wird, bewegen sich die größeren Moleküle langsamer durch das Gel, während sich die kleineren Moleküle schneller bewegen. Die verschiedenen großen Moleküle bilden verschiedene Bänder auf dem Gel.

Der Begriff "Gel" in diesem Beispiel verweist auf die Matrix, die verwendet ist, zu enthalten, dann die Zielmoleküle zu trennen. In den meisten Fällen ist das Gel ein crosslinked Polymer, dessen Zusammensetzung und Durchlässigkeit gestützt auf dem spezifischen Gewicht und der Zusammensetzung des zu analysierenden Ziels gewählt werden. Wenn man Proteine oder kleine Nukleinsäuren (DNA, RNS oder oligonucleotides) trennt, wird das Gel gewöhnlich aus verschiedenen Konzentrationen von acrylamide und einem Quer-Linker zusammengesetzt, verschiedene große Ineinandergreifen-Netze von polyacrylamide erzeugend. Wenn man größere Nukleinsäuren (größer trennt als einige hundert Basen), wird die bevorzugte Matrix agarose gereinigt. In beiden Fällen bildet das Gel einen Festkörper, noch poröse Matrix. Acrylamide, im Gegensatz zu polyacrylamide, ist ein neurotoxin und muss mit passenden Sicherheitsvorsichtsmaßnahmen behandelt werden, um zu vermeiden, zu vergiften. Agarose wird aus langen unverzweigten Ketten von unbeladenem Kohlenhydrat ohne böse Verbindungen zusammengesetzt, die auf ein Gel mit großen Poren hinauslaufen, die Trennung von Makromolekülen und makromolekularen Komplexen berücksichtigend.

"Elektrophorese" bezieht sich auf die elektromotorische Kraft (EMF), der verwendet wird, um die Moleküle durch die Gel-Matrix zu bewegen. Durch das Stellen der Moleküle in Bohrlöcher im Gel und die Verwendung eines elektrischen Feldes werden sich die Moleküle durch die Matrix an verschiedenen Raten, bestimmt größtenteils durch ihre Masse bewegen, wenn die Anklage zum Massenverhältnis (Z) aller Arten zur Anode, wenn negativ beladen, oder zur Kathode, wenn positiv beladen, gleichförmig ist.

Wenn mehrere Proben in angrenzende Bohrlöcher im Gel geladen worden sind, werden sie in individuellen Gassen parallel verlaufen. Abhängig von der Zahl von verschiedenen Molekülen zeigt jede Gasse Trennung der Bestandteile von der ursprünglichen Mischung als ein oder verschiedenere Bänder, ein Band pro Bestandteil. Die unvollständige Trennung der Bestandteile kann zu überlappenden Bändern, oder zu nicht zu unterscheidenden Schmieren führen, die vielfache ungelöste Bestandteile vertreten. Bänder in verschiedenen Gassen, die in derselben Entfernung von der Spitze enden, enthalten Moleküle, die das Gel mit derselben Geschwindigkeit durchgeführt haben, die gewöhnlich bedeutet, dass sie ungefähr dieselbe Größe sind. Es gibt verfügbare Molekulargewicht-Größe-Anschreiber, die eine Mischung von Molekülen bekannter Größen enthalten. Wenn solch ein Anschreiber auf einer Gasse in der Gel-Parallele zu den unbekannten Proben geführt wurde, können die beobachteten Bänder im Vergleich zu denjenigen des unbekannten sein, um ihre Größe zu bestimmen. Die Entfernung ein Band reist, ist zum Logarithmus der Größe des Moleküls ungefähr umgekehrt proportional.

Es gibt Grenzen zu electrophoretic Techniken. Da der vorübergehende Strom durch ein Gel Heizung verursacht, können Gele während der Elektrophorese schmelzen. Elektrophorese wird in Pufferlösungen durchgeführt, PH-Änderungen wegen des elektrischen Feldes zu reduzieren, das wichtig ist, weil die Anklage der DNA und RNS von pH abhängt, aber für den zu langen laufend, kann die Pufferungskapazität der Lösung erschöpfen. Weiter können verschiedene Vorbereitungen des genetischen Materials nicht im Einklang stehend einander aus morphologischen oder anderen Gründen abwandern.

Typen des Gels

Agarose

Gele von Agarose werden leicht geworfen und im Vergleich zu anderem matrices behandelt, weil die Gel-Einstellung eine physische aber nicht chemische Änderung ist. Proben werden auch leicht wieder erlangt. Nachdem das Experiment beendet wird, kann das resultierende Gel in einem Plastikbeutel in einem Kühlschrank versorgt werden.

Gel-Elektrophorese von Agarose kann für die Trennung von DNA-Bruchstücken im Intervall von 50 Grundpaar zu mehreren Megabasen (Millionen von Basen) das Verwenden des Spezialapparats verwendet werden. Die Entfernung zwischen DNA-Bändern einer gegebenen Länge wird durch das Prozent agarose im Gel bestimmt. Der Nachteil von höheren Konzentrationen ist die langen Durchlaufzeiten (manchmal Tage). Stattdessen sollte hoher Prozentsatz agarose Gele mit einer pulsierten Feldelektrophorese (PFE) oder Feldinversionselektrophorese geführt werden.

"Die meisten agarose Gele werden mit zwischen 0.7 % (gute Trennung oder Entschlossenheit von großen 5-10kb DNA-Bruchstücken) und 2 % (gute Entschlossenheit für kleine 0.2-1kb Bruchstücke) agarose aufgelöst im Elektrophorese-Puffer gemacht. Bis zu 3 % können verwendet werden, um sehr winzige Bruchstücke zu trennen, aber ein vertikales polyacrylamide Gel ist in diesem Fall passender. Niedrige Prozentsatz-Gele sind sehr schwach und können brechen, wenn Sie versuchen, sie zu heben. Hohe Prozentsatz-Gele sind häufig spröde und gehen gleichmäßig nicht unter. 1-%-Gele sind für viele Anwendungen üblich."

Gele von Agarose haben keine gleichförmige Porengröße, aber sind für die Elektrophorese von Proteinen optimal, die größer sind als 200 kDa.

Polyacrylamide

Gel-Elektrophorese von Polyacrylamide (SEITE) wird verwendet, um Proteine zu trennen, die sich in der Größe von 5 bis 2,000 kDa erwarteten bis die gleichförmige durch das polyacrylamide Gel zur Verfügung gestellte Porengröße erstrecken. Porengröße wird durch das Steuern der Konzentrationen von acrylamide und bis-acrylamide im Schaffen eines Gels verwendetem Puder kontrolliert. Sorge muss verwendet werden, wenn man diesen Typ des Gels schafft, weil acrylamide ein starker neurotoxin in seiner flüssigen und bestäubten Form ist.

Traditionelle DNA sequencing Techniken wie Maxam-Gilbert oder Methoden von Sanger hat polyacrylamide Gele verwendet, um DNA-Bruchstücke zu trennen, die sich durch ein einzelnes Grundpaar in der Länge unterscheiden, so konnte die Folge gelesen werden. Die meisten modernen DNA-Trennungsmethoden verwenden jetzt agarose Gele abgesehen von besonders kleinen DNA-Bruchstücken. Es wird zurzeit meistenteils im Feld der Immunitätsforschung und Protein-Analyse, häufig verwendet verwendet, um verschiedene Proteine oder isoforms desselben Proteins in getrennte Bänder zu trennen. Diese können auf einen nitrocellulose oder PVDF Membran übertragen werden, die mit Antikörpern und entsprechenden Anschreibern, solcher als in einem Westklecks zu untersuchen ist.

Normalerweise Agarose-Gele werden in 6 %, 8 %, 10 %, 12 % oder 15 % gemacht. Das Stapeln des Gels (5 %) wird oben auf dem Agarose-Gel und einem Gel-Kamm gegossen (der die Bohrlöcher bildet und die Gassen definiert, wohin Proteine, Beispielpuffer und Leitern gelegt werden), wird eingefügt. Der gewählte Prozentsatz hängt von der Größe des Proteins ab, das man identifizieren oder in der Probe untersuchen möchte. Je kleiner das bekannte Gewicht, desto höher der Prozentsatz, der verwendet werden sollte. Änderungen auf dem Puffersystem des Gels können helfen, weiter Proteine sehr kleiner Größen aufzulösen.

Stärke

Teilweise macht Hydrolysed-Kartoffelstärke für ein anderes nichttoxisches Medium für die Protein-Elektrophorese. Die Gele sind ein bisschen undurchsichtiger als acrylamide oder agarose. Nichtdenaturierte Proteine können gemäß der Anklage und Größe getrennt werden. Sie werden mit Napthal Schwarze oder Amido Schwarze Färbung vergegenwärtigt. Typische Stärke-Gel-Konzentrationen sind 5 % bis 10 %.

Gel-Bedingungen

Das Denaturieren

Ein Denaturieren-Gel ist ein Typ der Elektrophorese in der die heimische Struktur von Makromolekülen werden die innerhalb des Gels geführt wird nicht aufrechterhalten. Zum Beispiel werden Gele, die im SDS-SEITIGEN (Natrium dodecyl Sulfat polyacrylamide Gel-Elektrophorese) verwendet sind, entfalten und die heimische Struktur eines Proteins denaturieren. Im Gegensatz zur heimischen Gel-Elektrophorese kann Vierergruppe-Struktur nicht mit dieser Methode untersucht werden.

Eingeborener

Heimische Gel-Elektrophorese ist eine electrophoretic Trennungsmethode, die normalerweise in proteomics und metallomics verwendet ist.

Heimische SEITEN-Trennungen werden im Nichtdenaturieren von Bedingungen geführt. Reinigungsmittel sind nur an das Ausmaß gewöhnt, dass sie für lyse lipid Membranen in der Zelle notwendig sind. Komplexe bleiben — größtenteils — vereinigt und gefaltet, wie sie in der Zelle sein würden. Eine Kehrseite ist jedoch, dass sich Komplexe sauber oder wie vorherzusehen war nicht trennen können, da sie sich durch das polyacrylamide Gel so schnell nicht bewegen können wie individuelle, denaturierte Proteine.

Verschieden vom Denaturieren von Methoden, wie SDS-SEITIGE, heimische Gel-Elektrophorese verwendet kein beladenes Denaturieren-Reagenz. Die Moleküle, die (gewöhnlich Proteine oder Nukleinsäuren) deshalb trennen werden, unterscheiden sich nicht nur in der molekularen inneren und Massenanklage, sondern auch der Querschnittsfläche, und erfahren so verschiedenen Electrophoretic-Kraft-Abhängigen auf der Gestalt der gesamten Struktur. Da die Proteine im heimischen Staat bleiben, können sie nicht nur durch allgemeine Protein-Färbereagenzien sondern auch durch die spezifische Enzym-verbundene Färbung vergegenwärtigt werden.

Puffer

Es gibt mehrere für die Elektrophorese verwendete Puffer. Das allgemeinste Wesen, für Nukleinsäuren Tris/Acetate/EDTA (TAE), Tris/Borate/EDTA (TBE). Viele andere Puffer, sind z.B Lithium borate vorgeschlagen worden, der fast nie verwendet, auf Zitaten von Pubmed (PFD.), iso elektrischer histidine, pK verglichene Ware-Puffer usw. gestützt wird; in den meisten Fällen ist das behauptete Grundprinzip niedrigerer Strom (weniger Hitze) und oder verglichenes Ion mobilities, der zu längerem Pufferleben führt. Borate ist problematisch; Borate kann polymerize, und/oder mit cis diols wie diejenigen aufeinander wirken, die in der RNS gefunden sind. TAE hat die niedrigste Pufferungskapazität, aber stellt die beste Entschlossenheit für die größere DNA zur Verfügung. Das bedeutet eine niedrigere Stromspannung und mehr Zeit, aber ein besseres Produkt. PFD. ist relativ neu und ist in der Auflösung von Bruchstücken unwirksam, die größer sind als 5 kbp; jedoch, mit seinem niedrigen Leitvermögen, konnte eine viel höhere Stromspannung verwendet werden (bis zu 35 V/cm), was eine kürzere Analyse-Zeit für die alltägliche Elektrophorese bedeutet. Mindestens konnte ein Grundpaar-Größe-Unterschied in 3 % agarose Gel mit einem äußerst niedrigen Leitvermögen-Medium (1-Mm-Lithium borate) aufgelöst werden.

Vergegenwärtigung

Nachdem die Elektrophorese abgeschlossen ist, können die Moleküle im Gel befleckt sein, um sie sichtbar zu machen. DNA kann mit ethidium Bromid vergegenwärtigt werden, das, wenn intercalated in die DNA, fluoresce unter dem ultravioletten Licht, während Protein mit dem Silberfleck oder Coomassie Brilliant Blaues Färbemittel vergegenwärtigt werden kann. Andere Methoden können auch verwendet werden, um sich die Trennung der Bestandteile von Mischung auf dem Gel zu vergegenwärtigen. Wenn die zu trennenden Moleküle Radioaktivität, zum Beispiel in der DNA sequencing Gel enthalten, kann ein Autofunktelegramm des Gels registriert werden. Fotographien können Gele häufig mit Gel Doc genommen werden.

Das allgemeinste Färbemittel hat gepflegt, DNA zu machen, oder für die agarose Gel-Elektrophorese sichtbare RNS-Bänder ist ethidium Bromid, gewöhnlich abgekürzt als EtBr. Es fluoresces unter dem UV Licht wenn intercalated in die Hauptrinne der DNA (oder RNS). Indem es DNA durch ein EtBr-behandeltes Gel führt und sich sie mit dem UV Licht vergegenwärtigt, wird jedes Band, das mehr als ~20 ng DNA enthält, ausgesprochen sichtbar. EtBr ist ein bekannter mutagen, und sicherere Alternativen sind wie GelRed verfügbar, der zur geringen Rinne bindet.

Grüner SYBR bin ich ein anderer DsDNA-Fleck, der von Invitrogen erzeugt ist. Es ist teurer, aber 25mal empfindlicher, und vielleicht sicherer als EtBr, obwohl es keine Daten gibt, seinen mutagenicity oder Giftigkeit in Menschen richtend.

Sicherer SYBR ist eine Variante des SYBR Grüns, das, wie man gezeigt hat, niedrig genug Niveaus von mutagenicity und Giftigkeit gehabt hat, die nichtgefährliche Verschwendung unter den Vereinigten Staaten zu halten ist. Bundesregulierungen. Es hat ähnliche Empfindlichkeitsniveaus zu EtBr, aber wie SYBR Grün, ist bedeutsam teurer. In Ländern, wo die sichere Verfügung der gefährlichen Verschwendung obligatorisch ist, können die Kosten der Verfügung von EtBr den anfänglichen Preisunterschied jedoch leicht überholen.

Seit EtBr ist befleckte DNA im natürlichen Licht nicht sichtbar, Wissenschaftler mischen DNA mit negativ beladenen ladenden Puffern vor dem Hinzufügen von der Mischung zum Gel. Ladende Puffer sind nützlich, weil sie im natürlichen Licht (im Vergleich mit dem UV Licht für EtBr befleckte DNA), und sie Co-Bodensatz mit der DNA sichtbar sind (das Meinen, dass sie sich mit derselben Geschwindigkeit wie DNA einer bestimmten Länge bewegen). Xylene cyanol und blauer Bromophenol sind allgemeine in ladenden Puffern gefundene Färbemittel; sie laufen über dieselbe Geschwindigkeit wie DNA-Bruchstücke, die 5000 bp und 300 bp in der Länge beziehungsweise sind, aber die genaue Position ändert sich mit dem Prozentsatz des Gels. Andere weniger oft verwendete Fortschritt-Anschreiber sind Cresol Rote und Orange G, die an ungefähr 125 bp und 50 bp beziehungsweise laufen.

Vergegenwärtigung kann auch durch das Übertragen der DNA einer nitrocellulose Membran erreicht werden, die von der Aussetzung von einer Kreuzungsuntersuchung gefolgt ist. Dieser Prozess wird das Südliche Beflecken genannt.

Analyse

Nach der Elektrophorese wird das Gel mit einer ultravioletten Lampe (gewöhnlich durch das Stellen davon auf einem leichten Kasten illuminiert, während man Schutzzahnrad verwendet, um Aussetzung von der Ultraviolettstrahlung zu beschränken). Der Illuminator-Apparat enthält größtenteils auch Bildaufbereitungsapparat, der ein Image des Gels nach der Beleuchtung mit der UV Radiation nimmt. Das ethidium Bromid fluoresces rötlich-orange in Gegenwart von der DNA, da es intercalated mit der DNA hat. Das DNA-Band kann auch aus dem Gel geschnitten werden, und kann dann aufgelöst werden, um die gereinigte DNA wiederzubekommen.

Das Gel kann dann gewöhnlich mit einer Digitalkamera oder Kamera von Polaroid fotografiert werden. Obwohl die befleckte Nukleinsäure fluoresces rötlich-orange, Images gewöhnlich schwarz-weiß gezeigt werden (sieh Zahlen).

Die sogar kurze Aussetzung von Nukleinsäuren zum UV Licht verursacht bedeutenden Schaden der Probe. Der UV Schaden an der Probe wird die Leistungsfähigkeit der nachfolgenden Manipulation der Probe, wie ligation und Klonen reduzieren. Wenn die DNA verwendet werden soll, nach der Trennung auf dem agarose Gel ist es am besten, Aussetzung vom UV Licht durch das Verwenden einer blauen leichten Erregungsquelle wie XcitaBlue UV zum blauen leichten Umwandlungsschirm vom Lebens-Rad oder Dunklen Leser von Clare Chemicals zu vermeiden. Ein blauer erregbarer Fleck ist wie einer der SYBR Grünen oder Flecke von GelGreen erforderlich. Blaues Licht ist auch für die Vergegenwärtigung besser, da es sicherer ist als UV (Augenschutz ist nicht solch eine kritische Voraussetzung), und führt durchsichtigen Plastik und Glas durch. Das bedeutet, dass die Färbung heller sein wird, selbst wenn das Erregungslicht Glas- oder Plastikgel-Plattformen durchgeht.

Gel-Elektrophorese-Forschung nutzt häufig softwarebasierte Bildanalyse-Werkzeuge wie ImageJ aus.

Stromabwärts Verarbeitung

Nach der Trennung kann eine zusätzliche Trennungsmethode dann wie Isoelectric-Fokussierung verwendet oder SDS-SEITIG WERDEN. Das Gel wird dann, und die Protein-Komplexe physisch geschnitten, die aus jedem Teil getrennt herausgezogen sind. Jeder Extrakt kann dann, solcher als durch den peptide Massenfingerabdruck oder de novo sequencing nach dem Verzehren im Gel analysiert werden. Das kann sehr viel Auskunft über die Identität der Proteine in einem Komplex geben.

Anwendungen

Gel-Elektrophorese wird in forensics, molekularer Biologie, Genetik, Mikrobiologie und Biochemie verwendet. Die Ergebnisse können quantitativ analysiert werden, indem sie das Gel mit dem UV Licht und einem Gel-Bildaufbereitungsgerät vergegenwärtigt wird. Das Image wird mit der bedienten Kamera eines Computers registriert, und die Intensität des Bandes oder Punkts von Interesse wird gemessen und gegen den Standard oder die auf demselben Gel geladenen Anschreiber verglichen. Das Maß und die Analyse werden größtenteils mit der Spezialsoftware getan.

Abhängig vom Typ der Analyse, die wird durchführt, werden andere Techniken häufig in Verbindung mit den Ergebnissen der Gel-Elektrophorese durchgeführt, eine breite Reihe von feldspezifischen Anwendungen zur Verfügung stellend.

Nukleinsäuren

Im Fall von Nukleinsäuren ist die Richtung der Wanderung, vom negativen bis positive Elektroden, wegen der natürlich vorkommenden negativen durch ihr Zuckerphosphat-Rückgrat getragenen Anklage.

Doppelt gestrandete DNA-Bruchstücke benehmen sich natürlich als lange Stangen, so ist ihre Wanderung durch das Gel hinsichtlich ihrer Größe oder, für zyklische Bruchstücke, ihres Radius der Kreisbewegung. Kreisförmige DNA wie plasmids kann jedoch vielfache Bänder zeigen, die Geschwindigkeit der Wanderung kann abhängen, ob es entspannt oder superaufgerollt wird. Einzeln gestrandete DNA oder RNS neigen dazu, in Moleküle mit komplizierten Gestalten zusammenzufalten und durch das Gel auf eine komplizierte auf ihrer tertiären Struktur gestützte Weise abzuwandern. Deshalb werden Reagenzien, die die Wasserstoffobligationen, wie Natriumshydroxyd oder formamide stören, verwendet, um die Nukleinsäuren zu denaturieren und sie zu veranlassen, sich als lange Stangen wieder zu benehmen.

Die Gel-Elektrophorese der großen DNA oder RNS wird gewöhnlich durch die agarose Gel-Elektrophorese getan. Sieh die "" Methode-Beendigungskettenseite für ein Beispiel einer polyacrylamide DNA sequencing Gel. Die Charakterisierung durch die ligand Wechselwirkung von Nukleinsäuren oder Bruchstücken kann durch die Beweglichkeitsverschiebungssympathie-Elektrophorese durchgeführt werden.

Die Elektrophorese von RNS-Proben kann verwendet werden, um für die genomic DNA-Verunreinigung und auch für die RNS-Degradierung zu überprüfen. Die RNS von eukaryotic Organismen zeigt verschiedene Bänder von 28 und 18 rRNA, das 28-Band, das etwa zweimal so intensiv ist wie das 18-Band. Erniedrigte RNS hat definierte Bänder von weniger sharpely, hat ein geschmiertes Äußeres, und Intensitätsverhältnis ist weniger als 2:1.

Proteine

Proteine, verschieden von Nukleinsäuren, können unterschiedliche Anklagen und komplizierte Gestalten haben, deshalb können sie nicht ins polyacrylamide Gel an ähnlichen Raten, oder überhaupt abwandern, wenn sie eine Verneinung zu positivem EMF auf der Probe legen. Proteine deshalb, werden gewöhnlich in Gegenwart von einem Reinigungsmittel wie Natrium dodecyl Sulfat/Natrium dodecyl Phosphat (SDS/SDP) denaturiert, der die Proteine mit einer negativen Anklage anstreicht. Allgemein ist der Betrag von gebundenem SDS hinsichtlich der Größe des Proteins (gewöhnlich 1.4g SDS pro Gramm des Proteins), so dass die resultierenden denaturierten Proteine eine gesamte negative Anklage haben, und alle Proteine eine ähnliche Anklage zum Massenverhältnis haben. Da denaturierte Proteine wie lange Stangen handeln, anstatt eine komplizierte tertiäre Gestalt zu haben, wandert die Rate, an der der resultierende SDS Proteine angestrichen hat, im Gel ab ist nur zu seiner Größe und nicht seiner Anklage oder Gestalt relativ.

Proteine werden gewöhnlich durch Natrium dodecyl Sulfat polyacrylamide Gel-Elektrophorese (SDS-SEITIG), durch die heimische Gel-Elektrophorese, durch die quantitative polyacrylamide dauernde heimische Vorbereitungsgel-Elektrophorese (QPNC-SEITIG), oder durch die 2. Elektrophorese analysiert.

Die Charakterisierung durch die ligand Wechselwirkung kann durch electroblotting oder durch die Sympathie-Elektrophorese in agarose oder durch die kapillare Elektrophorese bezüglich der Bewertung von verbindlichen Konstanten und des Entschlusses von Struktureigenschaften wie glycan Inhalt durch die Lectin-Schwergängigkeit durchgeführt werden.

Geschichte

  • Die 1930er Jahre - die ersten Berichte des Gebrauches von Rohrzucker für die Gel-Elektrophorese
  • 1955 - Einführung von Stärke-Gelen, mittelmäßige Trennung
  • 1959 - Einführung von acrylamide Gelen; Scheibe-Elektrophorese (Ornstein und Davis); genaue Kontrolle von Rahmen wie Porengröße und Stabilität; und (Raymond und Weintraub)
  • 1969 - Einführung, Agenten besonders SDS Trennung der Protein-Subeinheit (Weber und Osborn) zu denaturieren
  • 1970 - Laemmli hat 28 Bestandteile von T4 phage mit einem Stapeln-Gel und SDS getrennt
  • 1975 - 2-dimensionale Gele (O'Farrell); isoelectric, der dann SDS Gel-Elektrophorese einstellt
  • 1977 - Sequencing-Gele
  • gegen Ende der 1970er Jahre - agarose Gele
  • 1983 - pulsierte Feldgel-Elektrophorese ermöglicht Trennung von großen DNA-Molekülen
  • 1983 - Einführung der kapillaren Elektrophorese

Ein 1959-Buch auf der Elektrophorese durch die Mailander Bahre zitiert Verweisungen von den 1800er Jahren. Jedoch hat Oliver Smithies bedeutende Beiträge geleistet. Bahre-Staaten: "Die Methode von Smithies findet... breite Anwendung wegen seiner einzigartigen separatory Macht." Genommen im Zusammenhang deutet Bahre klar an, dass die Methode von Smithies eine Verbesserung ist.

Siehe auch

  • Geschichte der Elektrophorese
  • Beweglichkeitsverschiebung von Electrophoretic prüft
  • Gel-Förderung
  • Isoelectric, der sich konzentriert
  • Zweidimensionale Gel-Elektrophorese
  • QPNC-SEITIGER
  • SDS-SEITIGER
  • SDD-ALTER
  • Nördlicher Klecks
  • Westklecks
  • Ostklecks
  • Zymography
  • Sympathie-Elektrophorese

Links


Glas / Gary Lineker
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