Gramm-Färbung (oder die Methode des Gramms) ist eine Methode, Bakterienarten in zwei große Gruppen (Mit dem Gramm positiv und mit dem Gramm negativ) zu unterscheiden.

Es basiert auf der Chemikalie und den physikalischen Eigenschaften ihrer Zellwände. In erster Linie entdeckt es peptidoglycan, der in einer dicken Schicht im Gramm positive Bakterien da ist. Ein Gramm positive Ergebnisse in einer purpurroten/blauen Farbe während ein Gramm negative Ergebnisse in einer rosa/roten Farbe.

Der Gramm-Fleck ist fast immer der erste Schritt in der Identifizierung eines Bakterienorganismus, und ist der Verzug-Fleck, der von Laboratorien über eine Probe durchgeführt ist, wenn keine spezifische Kultur verwiesen wird.

Während Gramm-Färbung ein wertvolles diagnostisches Werkzeug sowohl in klinischen Einstellungen als auch in Forschungseinstellungen, nicht ist, können alle Bakterien durch diese Technik endgültig klassifiziert werden, so mit dem Gramm variable und mit dem Gramm unbestimmte Gruppen ebenso bildend.

Das Wort Gram wird immer mit einem Kapital buchstabiert, sich auf Hans Christian Gram, den Erfinder von Gram beziehend, der Flecken verursacht.

Geschichte

Die Methode wird nach seinem Erfinder, dem dänischen Wissenschaftler Hans Christian Gram (1850-1938) genannt, wer die Technik entwickelt hat, während er mit Carl Friedländer im Leichenhaus des Stadtkrankenhauses in Berlin gearbeitet hat. Gram hat seine Technik nicht zum Zweck ausgedacht, einen Typ der Bakterie von einem anderen zu unterscheiden, aber Bakterien zu ermöglichen, mehr sogleich in befleckten Abteilungen des Lungengewebes gesehen zu werden. Er hat seine Methode 1884 veröffentlicht, und hat in seinen kurzen Bericht die Beobachtung eingeschlossen, dass der Fleckfieber-Bazillus den Fleck nicht behalten hat.

Gebrauch

Gramm-Färbung ist eine bakteriologische Labortechnik, die verwendet ist, um Bakterienarten in zwei große Gruppen zu unterscheiden (Mit dem Gramm positiv und mit dem Gramm negativ) gestützt auf den physikalischen Eigenschaften ihrer Zellwände. Gramm-Färbung wird nicht verwendet, um archaea, früher archaeabacteria zu klassifizieren, da diese Kleinstlebewesen weit unterschiedliche Antworten nachgeben, die ihren phylogenetic Gruppen nicht folgen.

Der Gramm-Fleck ist nicht ein unfehlbares Werkzeug für die Diagnose, Identifizierung oder phylogeny, und es ist von äußerst beschränktem Nutzen in der Umweltmikrobiologie. Es ist durch molekulare Techniken sogar im medizinischen Mikrobiologie-Laboratorium größtenteils ersetzt worden. Einige Organismen sind mit dem Gramm variabel (der bedeutet, können sie entweder negativ oder positiv Flecken verursachen); einige Organismen sind gegen jeden durch die Gramm-Technik verwendeten Fleck nicht empfindlich. In einem modernen molekularen oder Umweltmikrobiologie-Laboratorium wird der grösste Teil der Identifizierung mit genetischen Folgen und anderen molekularen Techniken getan, die viel spezifischer und an der Information reich sind als Differenzialfärbung.

Gramm-Färbung hat sich erwiesen, ein so wirksames diagnostisches Werkzeug zu sein, wie PCR. Besonders hinsichtlich der Tripper-Diagnose in Kuwait. Die Ähnlichkeit der Ergebnisse sowohl des Gramm-Flecks als auch PCR für die Diagnose des Trippers war 99.4 % in Kuwait.

Medizinisch

Gramm-Flecke werden auf Körperflüssigkeit oder Biopsie durchgeführt, wenn Infektion verdächtigt wird. Gramm-Fleck-Ertrag resultiert viel schneller als Kultur und ist besonders wichtig, wenn Infektion einen wichtigen Unterschied in der Behandlung und Prognose des Patienten machen würde; Beispiele sind cerebrospinal Flüssigkeit für Gehirnhautentzündung und synovial Flüssigkeit für septische Arthritis.

Färbung des Mechanismus

Mit dem Gramm positive Bakterien haben eine dicke einem Ineinandergreifen ähnliche aus peptidoglycan gemachte Zellwand (50-90 % des Zellumschlags), die beflecktes Purpurrot durch das Kristallviolett sind, wohingegen mit dem Gramm negative Bakterien eine dünnere Schicht haben (10 % des Zellumschlags), die beflecktes Rosa durch den Gegenfleck sind. Es gibt vier grundlegende Schritte des Gramm-Flecks:

• Die Verwendung eines primären Flecks (Kristallviolett) zu einer hitzefesten Schmiere einer Bakterienkultur. Hitzebefestigen tötet einige Bakterien, aber wird größtenteils verwendet, um die Bakterien am Gleiten anzubringen, so dass sie während des Färbeverfahrens nicht spülen.
• Die Hinzufügung einer Beize, die zum Kristallviolett bindet und es in der Zelle (Das Jod des Gramms) fängt
• Schnelle Entfärbung mit Alkohol oder Azeton und
• Gegenfärbung mit safranin. Gegen Carbol fuchsin wird manchmal safranin ausgewechselt, da es anaerobic Bakterien mehr höchst beschmutzen wird, aber es wird als ein Gegenfleck viel weniger allgemein verwendet.

Kristallviolett (CV) trennt sich in wässrigen Lösungen in und Chlorid Ionen ab. Diese Ionen dringen durch die Zellwand- und Zellmembran sowohl von mit dem Gramm positiven als auch von mit dem Gramm negativen Zellen ein. Das Ion wirkt mit negativ beladenen Bestandteilen von Bakterienzellen aufeinander und beschmutzt die purpurroten Zellen.

Jod (oder) wirkt aufeinander und bildet große Komplexe des Kristallvioletts und Jods (LEBENSLAUF-I) innerhalb der inneren und Außenschichten der Zelle. Jod wird häufig eine Beize genannt, aber ist ein Fallen stellender Agent, der die Eliminierung des Komplexes des LEBENSLAUFS-I und deshalb verhindert, färben Sie die Zelle.

Wenn ein decolorizer wie Alkohol oder Azeton hinzugefügt wird, wirkt es mit dem lipids der Zellmembran aufeinander. Eine mit dem Gramm negative Zelle wird seine lipopolysaccharide Außenmembran verlieren, und die innere peptidoglycan Schicht wird ausgestellt verlassen. Die Komplexe des LEBENSLAUFS-I werden von der mit dem Gramm negativen Zelle zusammen mit der Außenmembran gewaschen. Im Gegensatz wird eine mit dem Gramm positive Zelle gedörrt von einer Vinylalkohol-Behandlung. Die großen Komplexe des LEBENSLAUFS-I werden gefangen innerhalb der mit dem Gramm positiven Zelle wegen der multilayered Natur seines peptidoglycan. Der Entfärbungsschritt ist kritisch und muss richtig zeitlich festgelegt werden; der violette Kristallfleck wird sowohl von mit dem Gramm positiven als auch von negativen Zellen entfernt, wenn der decolorizing Agent auf dem zu langen (eine Sache von Sekunden) verlassen wird.

Nach der Entfärbung bleibt die mit dem Gramm positive Zelle purpurrot, und die mit dem Gramm negative Zelle verliert seine purpurrote Farbe. Gegenfleck, der gewöhnlich safranin oder grundlegender fuchsin positiv beladen wird, wird letzt angewandt, um decolorized mit dem Gramm negativen Bakterien eine rosa oder rote Farbe zu geben.

Einige Bakterien, nach der Färbung mit dem Gramm-Fleck, geben ein mit dem Gramm variables Muster nach: Eine Mischung von rosa und purpurroten Zellen wird gesehen. Die Klassen Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium und Propionibacterium haben Zellwände, die zur Brechung während der Zellabteilung besonders empfindlich sind, auf mit dem Gramm negative Färbung dieser mit dem Gramm positiven Zellen hinauslaufend. In Kulturen des Bazillus, Butyrivibrio und Clostridium, fällt eine Abnahme in der peptidoglycan Dicke während des Wachstums mit einer Zunahme in der Zahl von Zellen zusammen, die mit dem Gramm negativ Flecken verursachen. Außerdem, in allen Bakterien das befleckte Verwenden des Gramm-Flecks, kann das Alter der Kultur die Ergebnisse des Flecks beeinflussen.

Beispiele

Mit dem Gramm positive Bakterien

Mit dem Gramm positive Bakterien haben allgemein eine einzelne Membran durch einen dicken peptidoglycan umgebene (Monohaut).

Dieser Regel wird von zwei Unterabteilungen — Beute Firmicutes (abgesehen von den Klassen Mollicutes und Negativicutes) und Actinobacteria gefolgt. Im Gegensatz sind Mitglieder von Chloroflexi (grüne Nichtschwefel-Bakterien) Monohaut, aber besitzen einen dünnen oder abwesendes (Klasse Dehalococcoidetes) peptidoglycan und können negativ, positiv oder unbestimmt Flecken verursachen. Mitglieder der Deinococcus-Thermus Gruppe, verursachen Sie positiv Flecken, aber sind diderms mit einem dicken peptidoglycan.

Historisch haben die mit dem Gramm positiven Formen die Unterabteilung Firmicutes, ein für die größte Gruppe jetzt verwendeter Name zusammengesetzt. Es schließt viele wohl bekannte Klassen wie Bazillus, Listeria, Staphylokokkus, Streptokokkus, Enterococcus und Clostridium ein. Es ist auch ausgebreitet worden, um Mollicutes einzuschließen, Bakterien wie Mycoplasma, die an Zellwänden Mangel haben und durch das Gramm so nicht befleckt sein können, aber werden aus solchen Formen abgeleitet.

Mit dem Gramm negative Bakterien

Mit dem Gramm negative Bakterien besitzen allgemein eine dünne Schicht von peptidoglycan zwischen zwei Membranen (diderms). Die meisten Bakterienunterabteilungen, sind einschließlich des cyanobacteria, spirochaetes und der grünen Schwefel-Bakterien und des grössten Teiles von Proteobacteria (Ausnahmen mit dem Gramm negativ, die einige Mitglieder von Rickettsiales und das Kerbtier-endosymbionts von Enterobacteriales sind).

Mit dem Gramm unbestimmte Bakterien

Mit dem Gramm unbestimmte Bakterien antworten auf die Gramm-Färbung nicht und können deshalb entweder als mit dem Gramm positiv oder als mit dem Gramm negativ nicht bestimmt werden. Beispiele von ihnen, aber nicht beschränkt darauf, sind mit dem Gramm variable und saure schnelle Bakterien.

Siehe auch

• Bakterienzellstruktur
• Färbung (der Biologie)
• Trichrome beschmutzen

Außenverbindungen

• Gramm, das Technik-Video beschmutzt
• Gramm-Färbeverfahren (tote Verbindung)