Immunoperoxidase ist ein Typ von immunostain, der in der molekularen Biologie, medizinischen Forschung und klinischen Diagnostik verwendet ist. Insbesondere immunoperoxidase Reaktionen beziehen sich auf eine Unterklasse von immunohistochemical oder immunocytochemical Verfahren, in denen die Antikörper über eine peroxidase-katalysierte Reaktion vergegenwärtigt werden.

Immunohistochemistry und immunocytochemistry sind Methoden, die verwendet sind, um zu bestimmen, in denen Zellen oder Teilen von Zellen ein besonderes Protein oder anderes Makromolekül gelegen werden. Diese Flecke verwenden Antikörper, um zu spezifischen Antigenen, gewöhnlich des Proteins oder glycoprotein Ursprungs zu binden. Da Antikörper normalerweise unsichtbare, spezielle Strategien sind, muss verwendet werden, um diese bestimmten Antikörper zu entdecken. In einem immunoperoxidase Verfahren ein bekanntes Enzym weil wird ein peroxidase verwendet, um eine chemische Reaktion zu katalysieren, ein farbiges Produkt zu erzeugen.

Einfach wird eine sehr dünne Scheibe des Gewebes auf das Glas befestigt, das mit dem Antikörper oder einer Reihe von Antikörpern ausgebrütet ist, von denen der letzte mit dem peroxidase Enzym chemisch verbunden wird. Nach dem Entwickeln des Flecks durch das Hinzufügen des chemischen Substrats kann der Vertrieb des Flecks durch die Mikroskopie untersucht werden.

Typen von Antikörpern

Ursprünglich waren alle für immunostaining erzeugten Antikörper polyclonal, d. h. haben durch normale Antikörper-Reaktionen in Tieren wie Pferde oder Kaninchen erhoben. Jetzt sind viele monoclonal, d. h. erzeugt in der Gewebekultur. Antikörper von Monoclonal, die aus nur einem Typ des Antikörpers bestehen, neigen dazu, größere Antigen-Genauigkeit zur Verfügung zu stellen, und auch dazu zu neigen, mehr zwischen Gruppen zu entsprechen.

Methoden für die Immunoperoxidase-Färbung

Der erste Schritt in der Immunoperoxidase-Färbung ist die Schwergängigkeit des spezifischen (primären) Antikörpers zur Zelle oder Gewebeprobe. Die Entdeckung des primären Antikörpers kann dann direkt (Beispiel 1) oder indirekt (Beispiele 2 & 3) vollbracht werden.

:Example 1. Der primäre Antikörper kann mit dem peroxidase Enzym direkt markiert werden, das dann verwendet wird, um eine chemische Reaktion zu katalysieren, ein farbiges Produkt zu erzeugen.

:Example 2. Der primäre Antikörper kann mit einem kleinen Molekül markiert werden, das durch ein peroxidase-konjugiertes verbindliches Molekül mit der hohen Sympathie erkannt werden kann. Das allgemeinste Beispiel davon ist verbundener primärer Antikörper eines biotin, der zu einem Enzym-gebundenen streptavidin bindet. Diese Methode kann verwendet werden, um das Signal zu verstärken.

:Example 3. Ein unmarkierter primärer Antikörper wird mit einem allgemeinen sekundären Antikörper entdeckt, der alle Antikörper erkennt, die aus denselben Tierarten wie die Vorwahl entstehen. Der sekundäre Antikörper wird mit dem peroxidase Enzym markiert.

Optimale Färbung hängt von mehreren Faktoren einschließlich der Antikörper-Verdünnung, der Färbechemikalien, der Vorbereitung und/oder des Fixierens der Zellen/Gewebes und der Länge der Inkubation mit Reagenzien des Antikörpers/Färbung ab. Diese werden häufig durch die Probe und den Fehler aber nicht jede Sorte der systematischen Annäherung bestimmt.

Alternativen zu Peroxidase-Flecken

Andere katalytische Enzyme wie alkalischer phosphatase können statt peroxidases sowohl für direkte als auch für indirekte Färbemethoden verwendet werden. Wechselweise kann der primäre Antikörper mit dem Leuchtstoffetikett (immunofluorescence) entdeckt werden, oder gallertartigen Goldpartikeln für die Elektronmikroskopie angehaftet werden.

Gebrauch der Immunoperoxidase-Färbung

Färbung von Immunoperoxidase wird in der klinischen Diagnostik und in der Laborforschung verwendet.

In der klinischen Diagnostik kann immunostaining auf Gewebebiopsien für die ausführlichere Histopathological-Studie verwendet werden. Im Fall von Krebs kann es im Subklassifizieren von Tumoren helfen. Immunostaining kann auch verwendet werden, um zu helfen, Hautbedingungen zu diagnostizieren, glomerulonephritis und zum U-Boot klassifizieren Amyloid-Ablagerungen. Zusammenhängende Techniken sind auch in subtippenden Lymphozyten der der ganze auf der leichten Mikroskopie ziemlich ähnliche Blick nützlich.

In der Laborforschung können Antikörper gegen spezifische Anschreiber der Zellunterscheidung verwendet werden, um individuelle Zelltypen zu etikettieren. Das kann ein besseres Verstehen von mechanistischen Änderungen zu spezifischen Zellabstammungen ermöglichen, die sich aus einem besonderen experimentellen Eingreifen ergeben.

Links

• Immunohistochemistry Protokolle, Puffer und Fehlerbeseitigung